1.2 文献进展状况
在早期,虽然NMR的定量方面已有研究,但鉴于此方法主要用于结构定性,NMR方法的发展也主要集中于加强定性方面的信息。最近,Pauli[3]和他的同事们在一篇优秀的论文中引入qHNMR作为基于核磁共振技术的定量方法的简写。
NMR方法的灵敏度虽不如红外、紫外光谱或高效液相色谱,其优点为可同时测定药物制剂中的多种有效成分,具有简单、准确、专一性高和不破坏样品等优点[4]。不仅已被用于定量测定大量的药理活性药物,对于药物制剂分析,赋形剂一般不干扰;对于混合物或复方制剂分析,一般无需分离;还可区分及定量测定一些药物的立体异构体。
1.2.1 NMR定量
核磁共振波谱用于定量分析的基础是各化学环境不同的粒子吸收峰的面积,它只与所包含的粒子数有关,故不需引进任何校正因子,就可直接根据各共振峰的积分值推算所代表的自旋核的数量[4]。因此,积分值不但是化合物结构测定的重要参数之一,也是定量分析的重要依据。在进行定量测定时,常用方法是先比较被测化台物特定的基团信号与内标(或外标)化台物的适当信号的积分值,再通过一定公式计算被测化合物的准确含量。
在1H-NMR中,共振峰面积或峰高与产生该共振峰的质子数成正比,这是定量的依据。目前主要采用的定量方法如下[5]:
1.2.1.1 内标法(绝对定量法)
内标法为NMR定量分析中最常用的方法。至少需要知道被测物的分子量、选定进行定量积分的信号及产生该信号的质子数。实验时,在样品溶液中直接加入一定量内标物质后,进行NMR光谱测定。
此方法中内标的作用不同于常规分析方法中内标的作用。常规分析方法中,内标的作用是减少最终带人结果的操作误差,而此方法中,内标是用以定量的依据。
1.2.1.2 相对测量法
当不能获得样品纯品或者合适的内标时,可选用此法。此方法适用于含有1—2种杂质的样品的分析。先计算出样品指定基团上一个质子引起的吸收峰面积(A1/n1)和杂质指定基团上一个质子引起的吸收峰面积(A2/n2),再按相关公式计算。
1.2.1.3 外标法
将某组分的标准品制成一系列不同浓度的标准液,进行NMR测定。以所得图谱中某一指定基团上质子引起的峰面积对浓度作图,得标准曲线。再在平行条件下测得样品溶液该指定基团上质子的峰面积,代人标准曲线即得样品溶液浓度。
1.2.2 qHNMR技术在定量方面的应用
色谱是目前最可靠的定量方法,但是需要标准样品。核磁共振仪在有机化合物的结构测定上有着不可比拟的优势[6]。而且,随着技术的进步,它的灵敏度越来越高,在定量分析上的应用也越来越广泛。采用1 HNMR进行定量分析已有诸多文献报道。1 HNMR定量分析是通过比较特定的吸收峰的强度实现的,在不需引入任何校正因子的情况下,可直接根据共振峰的面积求出它所代表的氢原子的数目,积分值是它的主要依据。该方法具有快速、简便、准确,并且不会破坏样品的优点,是一种简便快捷的定量方法。
1.2.2.1 qHNMR技术在药物定量方面的应用
目前在国内,NMR技术在药学领域还主要应用于结构鉴定,在药物定量分析方面应用不多[5]。而国外在这方面的研究还是很多的,而且该定量方法已经进入英美药典附录并用于药典中某些药物的检查和含量测定。2010年,中国药典也新增了核磁共振波谱定量方法。因此研究核磁共振定量分析方法,有助于更好地将该法用于药品分析。
1.2.2.1.1 应用实例
不少文献报道了应用1H—NMR内标法测定药物的含量。
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