曲克芦丁(Troxerutin)是芦丁经羟乙基化而成的黄酮类化合物,又称维生素P4、维脑路通,是羟基芦丁中非常重要的成分之一[11]。  曲克芦丁在临床上被广泛地应用治疗一些疾病,如心肌梗塞、动脉硬化等。同时发现曲克芦丁有广泛的药理作用,如抗氧化、抗炎等。研究表明,曲克芦丁可以降低四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠实验性肝损伤血清中ALT的活性,降低小鼠血清中丙二醛的含量,抑制CCl4产生的自由基造成的脂质过氧化反应,进而对肝脏有保护作用,其肝脏保护机制与抑制细胞脂质过氧化有关[12-14]。D-GaIN/LPS致鼠肝衰竭的保护研究中发现:曲克芦丁对大鼠急性肝衰竭有保护作用,能降低肝细胞炎症,其机制与调控NF-κB、TNF-α等细胞因子的表达,减弱NO/MDA的活性有关[15]。

曲克芦丁有抗氧化与抗炎药理作用,在非酒精性脂肪肝的治疗上取得不错的疗效。然而目前,国内外对于曲克芦丁改善肝脏炎症的研究较少。本实验建立了BDE-47诱导的小鼠肝脏炎症模型,进而探讨曲克芦丁对BDE-47诱导的小鼠肝脏炎症的影响及机制。

2 材料与方法

2.1实验材料  

2.1.1动物材料

 24只八周龄,体重为31±2g的ICR小鼠(雄性,自国家啮齿类实验动物种子中心上海分中心购进)。实验小鼠可以自由接触啮齿类动物的食物和饮用水,并且定期更换饲料,清洁卫生,维持温度(23±1◦C)与湿度(60%)恒定,保证每天12 h光/暗,保持光照在上午8:30到下午8:30。实验室中驯化一周后,小鼠被随机等量分成4组,每组6只,称量各组小鼠的体重,然后对每组实施12周相应的处理,如下:

Control组:每日,小鼠自由取食,同时灌喂0.1% Tween-80与玉米油;

BDE-47组:BDE-47溶于玉米油中,每日灌喂150mg/kg,同时灌喂0.1% Tween-80;

BDE-47+Troxerutin组:每日灌喂含150mg/kg BDE-47的玉米油,同时每日灌喂含150mg /kg Troxerutin的0.1% Tween-80;

Troxerutin组:正常饮食,以150mg /(kg ·d) Troxerutin的 0.1% Tween-80灌喂。来.自>优:尔论`文/网www.youerw.com

2.1.2试剂及药品

曲克芦丁(纯度>99%,自宝鸡方晟生物开发有限公司购进);0.1% Tween-80 (自Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA购进);BDE-47(纯度>98%,自Chem Service购进);玉米油(自Sigma-Aldrich购进);DCFH-DA(自Sigma-Aldrich 购进);ALT测定试剂盒(自南京建成生物工程研究所购进);蛋白核质抽提试剂盒 (自Pierce Biotechnology购进);BCATM测蛋白试剂盒(自Pierce Biotechnology购进);20× LumiGLO® 反应液及20× Peroxide (自cell signalling购进);β-actin 抗体;羊抗兔二抗(自Cell Signaling Technology, Inc., Beverly, MA, USA购进);兔抗Histone H3抗体(自Cell Signaling Technology, Inc购进);NF-κB p65抗体;兔抗F4/80抗体;羊抗IL-1β抗体;Texas Red标记的抗兔抗体(购自Vector Laboratories);异硫氰酸(FITC)荧光标记的抗羊抗体;4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI,自北京中杉金桥生物技术有限公司购进)。

2.2实验仪器

恒温金属浴(自杭州大和热磁电子公司购进,型号FeroTec HB100);高速匀浆器(德国IKA公司,型号T10 basic);冷冻台式高速离心机(德国Eppendorf公司生产,型号为5810R);水平电泳槽 (北京六一仪器厂,型号DYCP-31B);蛋白转印电泳系统(美国BIO-RAD公司);凝胶成像系统(美国伯乐公司生产,型号Universal Hood II);紫外-可见分光光度计(日本岛津公司生产,型号UV-2501 PC );荧光显微镜(德国Zeiss,型号Axioskop 40)。

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