1 材料和方法 

1。1 样品采集

从浙江海底采样点1处采集的海泥和学校一些环境采样点2处采集的泥土。

1。2 仪器和试剂

1。2。1 主要仪器   

天平、定时恒温磁力搅拌器、立式压力蒸汽灭菌器、全自动电脑干燥箱、超净工作台、台式恒温振荡器、恒温摇床、Eppendorf移液枪系列(1000μl 、100μl )、冰箱。                     

1。2。2 主要试剂                               

胰蛋白胨(Tryptone)、酵母提取物(Yeast extract)、氯化钠(NaCl)                        琼脂粉。                             

1。3 培养基的配制

Luria-Bertani(LB)液体培养基用于菌株的培养,LB固体培养基用于E。coli的活化、抑菌圈的制作以及菌株的保存。

LB液体培养基:胰蛋白胨2g,酵母提取物1g,NaCl 2g,加蒸馏水定容至200ml。

配制步骤:

(1)按培养基的配方比例依次准确地称取酵母提取物、胰蛋白胨、NaCl放入烧杯中,胰蛋白胨很容易吸潮,在称取时动作要迅速。此外,称药品时严防药品混杂,一把汤匙只能用于一种药品,瓶盖也不要盖错。

(2)在上述烧杯中先加入少量的蒸馏水,再加入一个转子,放在磁力搅拌器上搅拌,待药品完全溶解后,将溶液倒入量筒,此时要小心转子一起倒入250ml量筒中,用蒸馏水冲洗烧杯2-3次,把残留的溶液洗下来,以防药品残留。

(3)然后加蒸馏水,溶液线快到200ml的时候,改为慢慢滴加,直到刻度线上。最后把定容好的溶液转移到蓝瓶中,用报纸包扎好,用记号笔标注培养基的名称、日期,等待灭菌。(LB固体培养基中添加3。6g琼脂粉,用锥形瓶盛装,标注同上。)

1。4 试管、平板和纸片

准备相应数量的试管和平板,用刷子洗刷干净后,用无菌水冲洗一遍,然后放到80度的烘箱里烘干,待烘干后,试管加塞后,每10支试管用报纸包扎好,麻绳捆扎好,平板也用报纸包扎好后,标注日期等待灭菌。文献综述

用剪刀将滤纸剪出一个个的小圆纸片,直径约为60毫米,然后用记号笔标记编号,放入一个干净的平板中,用报纸包扎好后,等待灭菌。

1。5 灭菌

使用前先查看高压蒸汽灭菌锅的水位线是否在高水位,不足的话要加入蒸馏水至线上。

然后将待灭菌的培养基、试管等器皿放进灭菌锅里,关闭锅盖,螺丝要对称拧紧,检查排气阀是否处在开的状态以及安全阀的状态。

打开电源,检查所以的参数设置是否按规定设好,灭菌为121℃、20min,然后按下“Work”键,灭菌锅开始工作。

待温度升至100℃时,关闭排气阀,压力开始上升。

待温度到达121℃时,灭菌开始计时,达到规定的灭菌时间后,等待温度降至80℃以下,再关闭电源,打开排气阀,待压力指针降到0MPa时,方可打开锅盖。

将灭菌后的物品取出,放入烘箱内,烘干后拿出,放好备用。

注意事项 :

检查密封圈是否正常,如有破损,需及时更换;

待灭菌物品放置不宜过紧,要留有一定的空隙;

灭菌过程正式上压时要预先排净灭菌器内的冷空气;

灭菌结束后,不可立即放气降压,要自然冷却降压;

操作过程中要注意安全,谨防烫伤;

定期更换灭菌器内用水,防止堵塞管道与锈损加热管;

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