在使用过程中一旦发现异常,应及时断电,停止使用;

定期请专业人员进行灭菌器压力表的安全检测。

1。6 Ecoli的活化

所用菌株为感受态E。coli,放置在标有名称日期的Ep管中,保存在-80℃的冰箱里。

将灭菌后的液体LB培养基冷却至不烫手,然后逐一倒入平板中,待冷却,备用。

接种的整个过程都是在无菌操作台上完成的,实验前,提前将实验台的紫外打开,照射20min,然后关闭紫外,打开日光灯和风机开关。

取出所需的菌株、移液枪、试管、LB液体培养基,放在无菌实验操作台上,然后点燃酒精灯,用酒精擦拭双手,试验台也擦拭干净,清除可能存在的杂菌,做到真正的无菌操作。用移液枪向试管中加入3mlLB液体培养基,将接种环放在酒精灯上燃烧,当接种环被烧成红色时,把存放有菌株的Ep管放在酒精灯旁边,打开盖子,待接种环冷却下来后,将接种环慢慢放入管中,取出一点菌种,接于试管中,收拾干净操作台,用记号笔在试管上标记好菌名和日期,将试管放在37℃的培养箱中,过夜摇床培养,剩余感受态菌种放回原处保存。。

第二天将培养好的试管取出,与待用培养基平板,一起放在无菌实验操作台上,然后点燃酒精灯,做好无菌措施,将接种环放在酒精灯上燃烧,当接种环被烧成红色时,把试管放在酒精灯旁边,打开塞子,待接种环冷却下来后,将接种环慢慢放入管中,蘸取一点菌种,然后在酒精灯旁把塞子塞上,放在一边。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

把准备好的待用平板放在酒精灯旁,打开盖子,把接种环放进去,进行三区划线。

第一区:先用左手托起平板,用中指、无名指和小拇指托起平板的底部,并且要注意保持水平,用食指和拇指捏住平板上盖,一端微微张开一小口,不要太大,以接种环方便进入划线为宜。千万注意,一定要在酒精灯的火焰旁操作。接种环可以在一区来回反复的划线,线一定要密。划完一区后,要将接种环放在火焰上灼烧至红,使接种环上的菌全部被杀死。

第二区:接种环灼烧过后,现在平板上靠一靠冷却一下,再在第一区交叉一点点,然后不要再接触到第一区,第二区划线也要密。首先不冷却一下,菌会被烫死,其次二区划线交叉太多不易划出单菌落。

第三区:和第二区操作相同,但是第三区的线一定要稀疏。且在划第三区线之前接种环也要灼烧。划完后,盖上平板,把接种环放在酒精灯上灼烧,以免残留菌种,然后放回原处,用酒精灯的盖子盖灭火焰,关闭灯光和风机开关,最后将电源开关关上。

用记号笔在平板上标注菌种名称和日期,将划好的平板用袋子装好,然后把平板放入37℃的培养箱,倒置培养18h。

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