流动相：乙腈(A)-水(0。1%乙酸B)，0-16min 12%-20%;16-35min 20%-44%（在进行HPLC前要进行抽滤）

  洗针液：乙腈:水=80:20共400 mL即320 mL乙腈和80 mL水（在进行HPLC前要进行抽滤）

  1。2。1。2小鼠眼球取血

    取好的血液放在离心管中备用

  1。2。1。3 取血后分离血清

  将取好的血液在室温条件下放置2小时（加血前要先用适量肝素作为抗凝剂润湿离心管，防止取得血液凝固），每隔半小时取其中的1/3，在离心机上离心10 min，5000 r/min后取上清，,再加入等量乙腈去除杂蛋，在用同样方法离心取上清，用移液枪放入进样瓶中备用。

注意：

（1）进样瓶用之前先用去离子水清洗3次后再用超声清洗仪清洗两次一次30 min一次15 min，再将瓶子放入烘干箱烘干一夜。

（2）取3只进样瓶标号，将离心好的血清按照标示好的方法用移液枪取好放入进样瓶中（瓶中放入小塑料管方便检测），加入的血清到进样瓶所示的刻度1处，放入高效液相色谱的进样处的托盘中准备进样。

  1。2。1。4高效液相色谱（HPLC）检测分析

查阅并比较相关文献与资料，得到了HPLC检测花青素实验条件[17]，

色谱柱是Innoval C18柱（250 mm×4。6 mm,5 μm），流动相条件为乙腈(A)-水(0。1%乙酸B)，0-16 min 12%-20%;16-35min 20%-44%;洗针液比例为乙腈:水=80:20共400 mL即320 mL乙睛和80 mL水，柱子温度为30℃，波长为278 nm。每个样进行检测时间为45 min，按照设定好HPLC的条件进行液相。每个样进行检测时间为45 min，按照设定好HPLC的条件进行液相。用HPLC检测出图谱。

    注意：操作HPLC过程：开主机2695-开紫外2489-开电脑-检查网络-进入Epower界面-检查制剂2695和2489是否正常-洗柱子30min-编辑样品条件开始运行。

 1。2。2花青素在生理盐水中的药代动力学分析文献综述

    为了确定花青素是不是在小鼠肝内降解，我进行了花青素在小鼠生理盐水里的药代动力学分析实验。

  1。2。2。1配制药品：

    花青素溶于1 mL生理盐水中所得浓度为1 mg/mL，再从中取0。1 mL配制好的花青素水溶液放入量筒中在加生理盐水至刻度线2mL，配成浓度为0。1 mg/mL。

    按样品处理的方法1。2。1。1配制液相的流动相

  1。2。2。2 高效液相色谱（HPLC）检测分析

    取0。3 mL（大约1/3）加到进样器中，再放入高效液相中进行检测，每隔半小时做一次共三次，按照同样条件得到图谱。

 1。2。3花青素在肝损伤小鼠体内的药代动力学分析

   1。2。3。1配制试剂：

0。3%CCl4:用20%CCl4配。（20% C四氯化碳×V四氯化碳）&pide;(V四氯化碳 + V橄榄油)=0。3%

                               即V橄榄油 = (197/3) × V四氯化碳

    经查相关文献最终确定按照10 mL/kg给小鼠腹腔注射四氯化碳，按每只小鼠重30克计算，要 配大约1。8 mL,所以我们配了3 mL。即取3 ml的四氯化碳溶于197 mL的橄榄油中，最终配成0。3%的四氯化碳。

    花青素药液：按每只小鼠重30克计算，每只老鼠要给药体积：6×(30&pide;10)×0。2=3。6 mL，因此可以配制5-10 mL，另外小鼠每天给药应该在10 mg/kg(100 μg/10g)，即相当于100 μg要溶解在0。2 mL中，因此药物配制浓度为：100 μg/0。2 mL=0。5(mg/mL)。因此，要配的药是浓度0。5 (mg/mL)总体积10 ml，即称取5 mg药溶解在10 mL生理盐水中。