按样品处理的方法1。2。1。1配制液相的流动相

  1。2。3。2 小鼠急性肝损伤模型的建立：

    经查文献确定小鼠肝损伤模型建立的CCl4的最佳染毒途径是灌胃，但由于我们研究的是急性肝损伤所以采用的是腹腔注射法，剂量为0。3% 10 mL/kg时间

为24 h。[18][19]取6只小鼠，雌雄各半，分两组，每组三只，用天平对每只小鼠进行称重并记录数据制成成表格。对每只小鼠进行标号处理并在鼠笼上做上标记♂♀，用注射器吸取0。3%四氯化碳腹腔注射建肝损伤模型（10 mL/kg腹腔注射），注射后继续观察小鼠是否有死亡，记录每只小鼠打的四氯化碳的量，并制作表格。

 1。2。3。3 花青素灌胃给药：

  建模后24小时用浓度为0。5 mg/mL花青素灌胃（0。2 mL/10g），灌胃完后继续观察是否有小鼠死亡，（考虑到单次给药不能使药物浓度达到稳态（CSS），因此每天二次，连续三天，即总共要灌胃6次，每种药物有6只老鼠）记录下每次给药时间，并制作表格。   

 1。2。3。4 不同时间点对小鼠眼球取血：

    步骤：取血方法和上面一样是摘眼球取血

先对雄鼠取血，在雄鼠之前形式时间对比，以半小时为时间间隔取血一次，同时对两只眼球取血，分别放在不同的离心管中，即第一只雄鼠所取得血分别标记花青素♂1-1和花青素♂1-2，依次往下类推标记。同理再对雌来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*鼠取血时间间隔仍为半小时，标记方法一样。分析时将第一次取血的雄鼠和雌鼠为一个时间点，以此往下类推若干时间段，最后选取得到三个时间点分别为5 min、30 min、60 min。

 1。2。3。5取血后分离血清：

（1）将离心管中的血放在室温条件下；（加血前要先用适量肝素作为抗凝剂润湿离心管，防止取得血液凝固） 

    （2）放入离心机中5000 rpm离心10分钟，取上清于干净的离心管中，同样标号方法如上； 

    （3）将取得的上清加入等量的乙腈（除去血清中的杂蛋白），在相同条件下进行离心，条件相同；

 1。2。3。6高效液相色谱（HPLC）检测分析不同时间点肝损伤小鼠血液内花青素曲线

查阅相关文献与资料，得到了HPLC检测花青素实验条件，条件和上面一样。

    ①将进样管用去离子水清洗3次后再用超声清洗仪清洗两次一次30 min一次15 min，再将瓶子放入烘干箱烘干一夜。

    ②取12只进样瓶标记方法如上表格所示将两次离心好的血清按照标示好的方法用移液枪取好放入进样瓶中（瓶中放入小塑料管方便检测），所加入的血清到进样瓶所示的刻度1处，放入高效液相色谱的进样处的托盘中准备进样。