2。实验材料和实验方法

2。1菌株论文网

菌种黑曲霉为学院生物实验室筛选并保存。

2。1。2原料和试剂

①原料

玉米芯、麦麸皮等碳源经过充分风干后粉碎过80~120目筛制得[18]

可溶性淀粉，牛肉膏，蛋白胨，尿素等来自于淮阴师范学院生物实验室

桦木木聚糖来自美国sigma公司产品

②试剂

营养液:KH2PO4  0。13%；(NH4)2SO4, 1%；CaCl2, 0。025%；MgSO4· 7H2O, 0。05%。

微量元素液:FeSO4· 7H2O,0。008%;MnSO4·4H2O, 0。006%

 ZnSO4· 7H2O, 0。003%; CoCl2· 6H2O,0。5%。

DNS试剂:将1416 mL蒸馏水、19。8g氢氧化钠和10。6 g 3,5-二硝基水杨酸混合，溶解后加入306g酒石酸钾钠、7。6mL苯酚（50℃熔化）、8。3g偏重亚硫酸钠，避光保存。

2。1。3培养基

PAD培养基：去皮马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂2%，自然PH，121℃灭菌，此培养基用于菌种保藏，平板分离。

基本发酵培养基:250ml的三角瓶中装入50ml的发酵培养基其中5ml营养液以及5ml微量元素液，柠檬酸缓冲液20ml，以玉米芯2%(w/v)作为碳源的初始条件。

2。2方法

2。2。1探究产酶条件文献综述

黑曲霉接种于PAD培养基，30℃培养至产生大量孢子，挑取孢子，放入灭菌去离子水中，激烈振荡至孢子完全分散，过滤以除去菌丝体后取适量孢子悬液接种于基础发酵培养基中。讲250ml的三角瓶装液50ml后放置于，转速150r/min，28℃的摇床中培养，作为初始条件。再将黑曲霉菌株在不同的营养条件和不同的培养环境下进行差别培养，即进行单一因素试验，而后经过一定方法测定木聚糖酶的活力，从而探讨出最适的产酶条件。

⑴碳源。该实验分别以质量分数均为2%的可溶性淀粉、麸皮、玉米芯、木聚糖为碳源。将一定量的孢子接种入发酵培养基中，混匀后置于28℃的摇床进行震荡培养，72h后对粗酶液进行离心，取上层清液测定比较酶活力。

⑵氮源。该实验在基本发酵培养基的基础上分别采用酵母膏、蛋白胨、尿素、牛肉膏、NH4NO3、(NH4)2SO4作为氮源，质量分数均为1%。将一定量的孢子接入发酵培养基中，混匀后放置于28℃的摇床震荡培养72h，对得到的粗酶液进行离心，取得上清液而后测定比较酶活力。

⑶培养时间。将黑曲霉的孢子定量的接入发酵培养基中，混匀后放置于28℃的摇床下进行震荡培养，培养时间分别为36h,48h,60h,72h,84h,96h。在培养时间到达时分别取出发酵液，测定酶活力从而进行比较。

⑷培养温度。将孢子定量接入基础发酵培养基，摇匀后分别置于温度为：24℃，26℃，28℃,30℃,32℃的摇床进行培养，培养72h小时后分别取出测定酶活力。

⑸PH。用1mol/L的NaOH和HCL对发酵培养基进行PH的调制，使培养基的PH分别达到:3。0，5。0，7。0，9。0，11。0。将这些调制好的培养基进行高压灭菌后再接入孢子，混匀后置于28℃摇床震荡培养72h，测定并比较酶活力。