2。3。4 酶活的测定原理

酶活力单位的定义：在测定条件下，每小时水解滤纸产生1mg还原糖（以葡萄糖计）所需的酶量定义为一个酶活力单位（14），木聚糖酶的酶活力是指在50℃，pH6。5的条件下，每分钟从浓度为5mg/ml的燕麦木聚糖溶液中降解释放出1umoL还原糖所需的酶量为一个活力单位（IU），还原糖与木糖等量。取出发菌株和诱变后挑取出来的菌株分别接入PDA液体培养基，30oC，150r/min培养72h，待长出里氏木霉后接种到发酵培养基中培养72h，使用DNS试剂测定酶活力（15）。

2。3。4。1 粗酶液的提取

取适量发酵液，室温下在 150 r/min 的摇床上振荡1 h，用滤布过滤后取滤液在4000 r/min 的条件下离心10 min，离心后取得的上清液即为粗酶液（16）。

2。3。4。2 木聚糖酶活力的测定方法

2。3。4。2。1酶活力的测定步骤

取8支试管按表1加入相关试剂，加完后再加入1。5mlDNS试剂，充分摇匀后置于沸水浴中加热5min，之后迅速取出并冷却至室温。8支试管均用蒸馏水定容至5。0ml。以0#试管试液为对照，在波长540nm处测定其他各试管中试液的吸光度值，结果见表1。文献综述

表1   不同木糖含量样本的配置与吸光度值

项目 0# 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7#

缓冲液加入量/uL 1000 990 985 980 975 970 965 960

木糖标准液加入量/uL 0 10 15 20 25 30 35 40

木糖含量/ug 0 100 150 200 250 300 350 400

吸光度值 0。000 0。217 0。365 0。491 0。635 0。752 0。859 0。935

（1）取3支试管各加入0。5ml的木聚糖底物，与待测酶液一起置于50℃恒温水浴中预热5min。

（2）在第1支和第2支试管中各加入0。5ml的待测酶液，在50℃恒温水浴中反应20min。

（3）待反应完全后，在3支试管中各加入1。5mlDNS试剂，然后在第3支试管中补加0。5ml的待测酶液。

（4）振荡并摇匀3支试管，将其置于沸水浴中反应5min。

（5）迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至5。0ml，以第3支试管试液作为对照。在波长540nm处测定第1支和第2支试管试液的吸光度值。吸光度值在0。25~0。35为正常。若不在此范围内则需改变酶液的稀释倍数并重新检测其活力（17）。

（6）待测酶液的反应液的吸光度值与水平控制酶液的反应液吸光度值之差的绝对值不得超过0。015