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过量表达RdreB1BI基因对草莓花期耐寒性和品质的影响(3)
实验试剂:
91.5ml0.05MNa2HPO4+8.5ml0.05M NaH2PO4,浓度为0.05mol/L磷酸缓冲液(pH7.8):。
称取1.94gMet用磷酸缓冲液定容至100ml,配成130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液。
称取0.061gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml,制成750µmol/L氮蓝四唑溶液,避光保存。
称取0.037g EDTANa2,用磷酸缓冲液定容至1000ml得到100µmol/LEDTANa2溶液。
称取0.075g核黄素用蒸馏水定容至1000ml,即为 20 µmol/L核黄素溶液,避光保存。
酶液提取:取草莓叶片2g于预冷的研钵中,加1ml磷酸缓液在冰浴上研磨成浆,转移至5ml试管中,加缓冲液使终体积为4ml。将试管置于4℃,10000r/min情况下离心20min,上清液即为SOD粗提液。
取10mL试管4支,2支为测定管,另2支为对照管,各溶液分别加入3.5ml缓冲液、0.5ml甲硫氨酸、0.5ml氮蓝四唑和0.5ml EDTANa2,其中2支测定管再加入10ul酶液,最后各管加入0.5ul核黄素。显色反应用量混匀后将1支对照管置暗处,其他各管于4000lx日光下反应20min。
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