蔗糖处理对玉米幼叶花青素合成的影响(4)
发芽率的计算公式=发芽的种子数／待检测的种子总数＊100％
2.2.2叶绿素和花青素的测定步骤
准确称取新鲜的小麦幼苗0.3g，放入研钵中研磨充分后加入1800μL含1％的酸化乙醇，转移到1.5mL的离心管中，用封口膜封口防止挥发，4℃黑暗条件下浸提24小时。浸提结束后，加入等体积的水混匀，12000r/min离心10min。用分光光度计在652nm下测定样品的值；测完后把样品重新倒回离心管，再加入600μL氯仿除去蛋白及杂质，颠倒混匀后静置5min，12000r/min离心10min，取上清在535nm下测吸光值。
2.2.3可溶性糖的测定步骤[23-25]
（1）称取重约0.25g的新鲜小麦幼苗叶片，剪碎放入研钵中，加乙醇少许，仔细研磨成浆状，倒入烧杯中，用70℃热水洗涤研钵，洗液并入烧杯中，再加入蒸馏水1.5-2mL。将烧杯放在70-80℃水浴箱加热约30min。
（2）待溶液冷却后一滴一滴的加入饱和中性醋酸铅溶液直到不再产生白色沉淀止。本文来自优尔/文(论"文?网，毕业论文 www.youerw.com 加7位QQ324~9114找原文
（3）然后将此混合物过滤到50mL的容量瓶中，充分震荡。将此混合物倒入小烧杯中，加入约0.15g的草酸钠粉末，再进行过滤，得到的溶液即为可溶性糖溶液。
（4）吸取提取液1mL,放入一试管中，加入5mL蒽酮试剂于沸水浴中10min,取出
冷却，在分光光度计上于620nm处测定分光光度值。
2.2.4 丙二醛的测定步骤[26-27]
（1）分别取小麦幼苗叶片0.2g，洗净擦干。
（2）加1mL蒸馏水于研钵中充分研磨，并转移到试管中，再用4mL蒸馏水冲洗研钵（分 两次），仍转移至试管中。
（3）向每个试管提取液中加入5mL0.5％硫代巴比妥酸溶液，充分摇匀。
（4）置沸水浴中煮沸10min，立即取出放入冷水中冷却 。
（5）配平后，3000r/min离心15min,取上清液用分光光度计测其450nm、532nm、 600nm处的吸光度。
2.2.5 SOD的测定步骤 [28]
（1）称取材料0.2g，加入1mL遇冷的磷酸缓冲液在冰峪上研磨成浆，加缓冲液使体积为5mL。取2mL于1000r/min下 离心20min，上清液即为SOD粗体液。
（2）取5mL的试管若干，按下表加样 [19-20]：
表 2-2 SOD测定步骤加样顺序
| 试剂（酶液） | 用量/mL |
| 0.05mol/L磷酸缓冲液 | 1.5 |
| 130mmol/L蛋氨酸溶液 | 0.3 |
| 750mmol/L氮蓝四唑溶液 | 0.3 |
| 100μmol/LEDTA-Na2溶液 | 0.3 |
| 20μmol/L核黄素溶液 | 0.3 |
| 酶液 | 0.05 |
| 蒸馏水 | 0.25 |
| 总体积 | 3.0 |