青枯劳尔氏菌分化复杂,各国科学家一直在进行种以下分类或分型的各种尝试。在遗传型这一分类体系提出前(Fegan and Prior, 2005),生理小种和生化变种两个亚分类系统长期来被国际上所公认:一是按不同来源菌株对不同植物种类的致病性差异,即按照寄主范围,将青枯菌分成5个生理小种,另一个则是根据不同菌株对3种双糖(麦芽糖、乳糖和纤文二糖)和3种己醇(甘露醇、山梨醇和甜醇)氧化产酸能力的差异,将青枯菌划分为7个生化变种(Hayward, 1964;French,1993)。2005年Fegan和Prior正式提出了新的分类体系。在对ITS区域序列分析基础上,进行多重PCR,反应中利用四个特异性的正向引物,一个共同的反向引物和759/760引物对,每一个特异性的正向引物与一个种系相对应,将青枯菌分成四个遗传型(Phylotype),一个遗传型就是一个单世系。遗传型Ⅰ与Cook表述的第一大类等同,包括来自亚洲,生化变种为3、4和5的菌株;遗传型Ⅱ与Cook表述的第二大类群等同,包括来自美洲,生化变种为1、2和N2的菌株;遗传型Ⅲ主要包括来自非洲和邻近岛屿的菌株,属于生化变种1和N2;遗传型Ⅳ主要来自印度尼西亚,属于生化变种1、2和N2。每个遗传型又包括一系列的序列型(Sequevar)。序列型指一组菌株在被测序的区域内,出现高度保守序列,这组菌株被称为一个序列型,而仅仅一个菌株的序列簇是不能被称为序列型(如菌株CIP100)。目前,序列型的分类依据主要是内切葡聚糖酶的基因序列,目前已将青枯菌分成了20多个序列型。未来希望能对基因组的其它区域也能够进行测序。例如:对hrpB测序,从而来证实这些基因变种的划分。每个序列型又包含了一系列的纯系,可以用基因组指纹图谱的方法来鉴定一个纯系,如PFGE、AFLP或rep-PCR等。和以前分类方法(生化变种和生理小种)相比,新的分类方法更加能反应青枯病菌的多样性。
1.2 细菌性青枯病的表现症状
受青枯劳尔氏菌侵染的植株一般在幼苗期较少显症,多在现蕾开花后表现急性显症。染病植株比健株稍矮,叶色较淡,在晴天高温的日间,病株茎和叶片自上而下萎垂,晚间和清晨尚可恢复,经3—4天或更短时间全株茎叶萎蔫枯死,但病株在短期内仍保持青绿颜色,叶片不脱落。横切病株茎部可见到文管束变褐,用手挤压有污白色菌脓从切口处溢出,这是体内寄生的病原菌溢脓。田间可以此方法快速诊断青枯病。
1.3 细菌性青枯病的发生规律
青枯病菌主要在土壤中及遗落在土壤中的病残体上越冬,也能在各种生长着的寄主体内及根际越冬。青枯病的主要初次侵染来源是土壤、病残组织和肥料中的病菌。这些病原菌由排灌水、流水、带菌肥料、病苗或附在幼苗上的病土、人畜以及生产工具带菌传播。青枯病菌在一般条件下是从根部伤口侵入,不能从气孔侵入。因此,在寄主移栽造成的根伤口或根部快速生长时因农事操作造成的根伤口有利于青枯病菌的侵入。
青枯病是高温高湿型病害,适于发病及蔓延的气温30~35℃,空气相对湿度95%~100%。雨量多湿度大,病害发展快,为害重,相反雨量少,湿度低,病害发展受抑制,为害相对较轻。初夏大雨后骤晴,排水不利,钾肥不足,往往易于造成该病的大发生。
不同土壤类型青枯病的发病程度差异较大。一般情况下,土质粘重、易板结或土壤含沙量过高都易诱发病害,沙壤土发病较轻。通常地势高的地发病较轻,地势低的地发病较重,低洼积水处更重,田块的入水口或流水经过处也较重。另外,青枯病在偏酸性的土壤发病稍重,在碱性土壤上发病较轻。土壤肥力和肥料种类、数量也都对青枯病的发生有较大的影响。
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