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鹅掌楸属植物生物活性成分的研究(6)
常用的溶剂提取方法有以下几种,分别是:
(1)煎煮法:是我国最早使用的传统浸出方法,用水将药材加热煮沸一定时间来提取其所含成分。此法简单易行,能煎出大部分有效成分,但是煎出液中杂质较多,且不适合挥发性成分及遇热易破坏的成分的提取。
(2)浸渍法:此法是将药材粉末或碎片放入容器后加适宜的溶剂(如乙醇、水、烯醇等)浸渍,以溶出其中的有效成分。本法适用于热不稳定成分的提取,操作起来方便简单,但是其提取时间长,提取效率较低。
(3)渗漉法:具体操作是将药材粉末先装入渗漉器中浸渍膨胀24-28小时,然后不断添加新溶剂,使其自上而下渗透过药材,从渗漉器下部流出、收集浸出液。操作过程为动态,效果优于浸渍法,但是溶剂消耗较多,操作较为繁琐。
(4)回流提取法:用有机溶剂采用回流加热进行提取,提取液中即含有所需成分,该法避免了溶剂的挥发损失及其对人体的伤害,但是受热易破坏的成分不宜使用,同时溶剂消耗较大,操作麻烦。
(5)连续回流提取法:弥补了回流提取法溶胶消耗大的不足。连续回流提取法提取时间长,热不稳定成分不可采用。
(6)酶提取法:利用纤文素酶(主要)、蛋白酶、果胶酶等,破坏植物的细胞壁,以利于有效成分最大程度溶出的提取方法。
(7)超临界流体萃取法:利用超临界状态下的流体进行萃取时,从液体或固体中萃取药材中有效成分并进行分离的方法。常用二氧化碳作为超临界流体。此法无溶剂残留,高效简单,绿色安全,同时可与其他色谱技术及IR、MS联用,适用于热不稳定物质的提取。
(8)超声波助溶萃取法:利用超声破增大物质分子运动频率和速度,增加溶剂穿透力,提高药物成分溶出速度和次数,缩短提取时间的浸提方法。其优点是:不破坏热不稳定和易水解成分、安全性高、操作简单、萃取效率高、应用范围广。
(9)微波助溶萃取法:利用微波助能来提高提取效率的方法。微波经溶剂到达药材内部,通过升高细胞内部温度、增强内部压强使细胞破裂后流出胞内物质,然后被溶剂溶解后得以提取。
2.1.1.2水蒸气蒸馏法
此法适用于难溶或不溶于水、能随水蒸气蒸馏而不被破坏的有效成分的提取,且约在100℃时存在一定的蒸气压,当水蒸气加热沸腾时,能将有效成分随水蒸气一同溢出。
2.1.1.3 升华法
有些药材中含有的一些成分具有升华的性质,可采用升华法直接提取。
2.1.1.4 压榨法
某些药材中的有效成分含量丰富且存在于植物的汁液中,可将其新鲜原料直接压榨后提取汁液。
2.1.2 天然产物的分离与精制
2.1.2.1 硅胶柱层析
硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离, 一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较小的物质不易被硅胶吸附,整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。极性小的硅胶柱层析流动相用乙酸乙酯/石油醚系统;极性较大的用甲醇/氯仿系统;极性大的用甲醇/水/正丁醇/醋酸系统;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸。
2.1.2.2 Sephadex LH-20层析
Sephadex LH-20(葡聚糖凝胶)的分离原理是根据分子大小,主要有两方面:以凝胶过滤作用为主,兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。因为凝胶过滤作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脱下来,小分子的化合物保留强,最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱, Sephadex LH-20对化合物还起反相分配的作用,所以极性大的化合物保留弱,先被洗脱下来,极性小的化合物保留强,后出柱。如果使用正相溶剂洗脱,这主要靠凝胶过滤作用来分离。
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