表达鸡法氏囊病毒VP2蛋白重组枯草芽孢杆菌的构建及其免疫效力的研究(2)
4讨论19
致谢20
参考文献21
附录22
表达鸡法氏囊病毒VP2蛋白重组枯草芽孢杆菌的构建引言
鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease；IBD）是目前养鸡业中的主要传染病之一,由法氏囊病毒（IBDV）引起，本病限于2—10周龄的雏鸡发病,多发于4—6周龄,2周龄以下和成鸡均不感染发病,因为前者法氏囊尚未发育,后者法氏囊已经退化的缘故。临床峰期为一周,死亡率一般约15％左右,最高可达20—30％。由于雏鸡腔上囊的病变,使免疫系统受损害,易并发其它疾病,给养鸡业带来较大损失[1]。
由于法氏囊病毒在外界环境中较为稳定,至今仍无有效的治疗方法, 免疫接种一直是防治IBDV的最佳选择, 目前使用的IBD传统疫苗主要有弱毒活疫苗和灭活疫苗,主要有以下特点：①弱毒活疫苗免疫原性好, 但存在免疫不全、疫苗外源性或垂直传播性病原污染以及疫苗接种动物后毒力返强的危险, 常导致变异株的不断出现,造成恶性循环;弱毒苗常引起免疫抑制,减毒不充分时会导致床感染, 毒力反强;过分减毒又造成疫苗效价降低。②灭活疫苗运输方便但接种较麻烦, 需注射免疫后产生的抗体, 持续时间短, 且引起局部疼痛和其他不适等,对鸡造成一定的损害。
禽类不同于哺乳动物，体内的淋巴管较少，除胸腺和脾等典型淋巴器官外[2]，也不具有明显的外周功能性淋巴结[3]。禽抵御病原微生物及其他有害物质的入侵主要依靠呼吸道、消化道内的黏膜相关淋巴组织[4]。这些黏膜相关淋巴组织贯穿于整个免疫网络，主要包括哈德氏腺、头部相关淋巴样组织(HALT)、回肠派尔氏斑(PP)、盲肠扁桃体(CT)以及肠道末端的法氏囊等[5,6]。在整个免疫网络中，禽类的免疫系统也是由细胞免疫和体液免疫相互作用完成的。胸腺是控制T细胞形成的器官，主宰着细胞免疫[7]。哈德氏腺、盲肠扁桃体、法氏囊是以B细胞为主产生抗体的重要场所，主宰禽类的体液免疫[8]。在禽类，淋巴样组织广泛分布于机体的胃肠道内。鸡的胃肠道相关淋巴组织(GALT)主要有回肠派尔氏斑、盲肠扁桃体、法氏囊及固有膜中的弥散淋巴集结[9]。Herbet通过免疫试验证实，禽类免疫要想取得良好的免疫效果，是细胞免疫、体液免疫甚至黏膜免疫综合作用的结果。黏膜组织是一个巨大的外环境表面，是机体和环境进行交流的场所，也是许多病原体侵入机体的重要途径。黏膜免疫系统主要指呼吸道、消化道及泌尿生殖道黏膜固有层和上皮细胞下散在的无被膜淋巴组织，它在抵抗感染方面起着极其重要的作用。黏膜抗感染保护性作用的产生依赖于黏膜局部和系统的免疫反应[10]。一方面黏膜内特殊的免疫组织结构与体内广泛分布的淋巴组织紧密相连，T细胞和B细胞的数量远远大于系统免疫体系，尤其是肠道免疫细胞占全身免疫细胞的80%。另一方面黏膜免疫系统能对表面众多、数量巨大的抗原进行准确的识别和加工，并能产生特异的分泌型免疫抗体sIgA和IgM。近几年来，黏膜免疫在禽类免疫中所发挥的作用日益受到人们的重视，并被认为处于现代免疫预防的中心地位。
因此，寻找一种高效的口服黏膜免疫疫苗，来降低雏鸡患上法氏囊病的几率，具有很大的现实意义。基因工程疫苗具有高效、特异和广谱等优点而一直广受研究者的青睐，也一直是各国研究的热点[11]。基因工程活载体疫苗是用DNA重组技术, 将编码病原微生物保护性抗原的基因导入受体菌细胞,使其在受体细胞高效表达, 分泌保护性抗原肽链。例如，活疫苗载体如沙门氏菌已被证明能够靶向一种覆盖肠道相关淋巴组织（GALT）的肠道感知细胞（即M细胞）[12]，其在刺激粘膜免疫应答中起关键作用。另外，沙门氏菌具有被吞噬细胞摄取并横向网状内皮系统的能力，从而导致全身免疫应答的刺激[13-15]，可以递送多种异源抗原，包括来自HBV的病毒肽[16]，以及源自鼠疫耶尔森菌的F1-Ag和V-Ag抗原[17]，这种疫苗能诱导强烈的体液免疫应答，包括粘膜免疫小鼠中的血清IgG和分泌型IgA。所以如何选择一种有效的黏膜免疫受体菌细胞，使之成功发挥抗原递送载体的效果呢？