原花青素在杂草稻和栽培稻颖果发育过程中的积累(3)
1.2.2.3 杂草稻及栽培稻抽穗后不同发育阶段的颖果观察
1.2.2.3.1 直接观察
每次采集样品后，剥去谷壳，立即在解剖镜下观察颖果的形态及颜色，并拍照记录。同时，分别将抽穗后第0天、5天、10天、15天、20天、25天、30天、35天采集到的杂草稻162和栽培稻日本晴的颖果进行对比。采集完所有样品后，将每个发育阶段的杂草稻162颖果剥去谷壳，在解剖镜下观察并拍照，对颖果的形态及颜色进行纵向比较，观察发育过程。栽培稻日本晴的颖果用同样的方法处理。
1.2.2.3.2 染色观察
将抽穗后第0天、5天、10天、15天、20天、25天、30天、35天采集到的杂草稻162和栽培稻日本晴的颖果剥去谷壳后分装在不同的离心管中，加入适量的1%DMACA（6N HCl）溶液使之浸没，染色1小时后取出，在解剖镜下观察颖果的染色情况。分别将抽穗后同一生长时期的杂草稻162和栽培稻日本晴颖果的染色情况进行对比，同时分别对杂草稻162和栽培稻日本晴抽穗后不同发育阶段的颖果进行纵向比较，以此分析原花青素的积累情况。培稻日本晴的颖果用同样的方法处理。
1.2.3 颖果显微结构的观察
1.2.3.1 固定液配置
福尔马林—醋酸—酒精固定液（FAA）：50%酒精89ml, 福尔马林5ml,冰醋酸6ml,甘油5ml。
1.2.3.2 制作切片及观察
1.2.3.2.1 固定
将样品进行分装，在FAA 固定液中固定7天。
1.2.3.2.2 脱水、透明、浸蜡
用蒸馏水或50%酒精浸洗2～3次后，依次在70%、85%、95%、100%、100%浓度的酒精中浸泡4小时，经梯度酒精脱水；依次在酒精和二甲苯之比为3:1、1:1、1:3的混合溶液以及二甲苯溶液中4小时进行透明；逐次加入蜡屑于装有样品和透明剂的指形管中直至饱和，控温40℃过夜；分别在50℃、60℃、60℃的温度下渗蜡2小时。
1.2.3.2.3 包埋、切片、展片
将材料与熔化了的石蜡一起倒入包埋盒，将材料拨正后冷却凝结；将包裹材料的蜡块修成长方形小块，用切片机切出8μm切片；滴适量粘片剂于载玻片上，将切片条带置于水面展平，吸去多余水分后烘干。
1.2.3.2.4 脱蜡、染色
二甲苯1小时→1:1二甲苯无水乙醇混合溶液3分钟→100%酒精3分钟→95%酒精3分钟→85%酒精3min→1%DMACA（6N HCl）溶液30分钟→85%酒精5秒