1.2.2 超声波法

    超声波法[5]提取活性成分，是目前比较新的方法。它的原理是超声的空化作用对细胞膜的破坏有助于要提取化合物的释放与溶出，超声波使提取液不断震荡，有助于溶质扩散。同时超声波的热效应使水温基本恒定，对原料有水浴作用。因此，超声波法大大缩短了提取时间，提高了有效成分的提出率，原料的利用率。2011年，陈红等[6]以侧柏叶为原料，采用超声辅助提取法，以固液比、超声时间和提取剂乙醇浓度做三水平四因素正交试验，在乙醇浓度为60%、超声频率为40kHZ、固液比为1:20（g/ml）和超声时间20min条件下的黄酮提取量为20.12%。

1.3 黄酮类物质的研究进展

黄酮类化合物是指一个中央三碳原子两边各自链接至少一个含有酚羟基的苯环而成的一系列化合物，其基本母核为2-苯基色原酮。黄酮类化合物在植物中和浆果中含量高且种类繁多。目前已经发现4千多种，分子结构也各有不同。黄酮类化合物根据(1)中央三碳原子链的氧化程度(2)B环的链接位置(3)中央三碳原子链是否构成环状结构这三点特征把黄酮类化合物分别列成以下几种(1)黄酮类(flavones) (2)黄酮醇类(flavonol) (3)异黄酮类(isoflavone) (4)查尔酮类(chalcones) (5)黄烷-3-醇类(flavan-3-ols) (6)花色素类(anthocyanidin) (7)橙酮类(aurones)，除此之外还有很多很复杂结构的黄酮类化合物，一般有榕碱，异榕碱等生物碱酮[7]。

 黄酮分子结构图

1.3.1 黄酮分离纯化研究进展

从植物中提取的总黄酮的纯度一般都很低，包含各种非黄酮类杂质，例如糖类，色素，蛋白质等。需要进行其他操作来分离纯化得到高纯度的黄酮，分离方法包括：柱层析，薄层层析，pH梯度萃取法以及高速逆流色谱法等。目前常用的方法包括有机溶剂萃取法，柱层析法和高效液相色谱法。

1.3.1.1 有机溶剂萃取法

有机溶剂萃取法利用黄酮类化合物在2种互不相溶或微溶的有机溶剂间(如乙醇和氯仿、乙醇和乙酸乙酯、正丁醇和水等)，根据溶解度大小的差异，分配系数大小的差异，会使黄酮类化合物从某一种溶剂中转移到另一种溶剂中，通过多次萃取达到提取目标化合物的目的。溶剂萃取法一般是分离纯化的第一步。根据此原理黄酮类化合物在两种有机溶剂之间溶解度能力大小差异月明显，提取的效果也会越好，例如如果是偏脂溶性的黄酮类化合物，那么萃取溶剂就会选择偏脂溶性的如氯仿、乙醚等。但如果是提取的水溶性黄酮类化合物，则萃取溶剂应为水和乙酸乙酯或水和正丁醇等。 

1.3.1.2 大孔吸附树脂法

大孔吸附树脂为一类形状类似为圆形的小球状固体颗粒。有极性大孔吸附树脂和非极性大孔吸附树脂之分。理化性质很稳定，可选择性高。当黄酮类物质通过树脂时由于其球状形态大大增加了每颗树脂与黄酮类化合物接触的比表面积，他们之间通过范德华力能强烈的吸附在一起。根据不同黄酮类物质吸附能力的强弱以及分子量的差别，通过选择洗脱溶剂可以将他们洗脱下来，从而达到提纯的.张志昆等采用6种大孔吸附树脂对黑秽醋栗叶中黄酮的纯化工艺进行了研究，工艺优化结果为，大孔吸附树脂选择为NKA-9，洗脱溶剂选择为乙醇，洗脱速度为2BV/h，纯化后的黄酮纯度可以达到41%，与之前有大幅度的提升，由此说明大孔吸附树脂在黄酮类物质的纯化中有着明显的作用[8]。

1.3.1.3 制备型HPLC色谱法

制备型液相色谱法在分离单体的过程中扮演着非常重要的作用，对于那些普通的柱层析方法和大孔吸附树脂分离纯化方法都难以分离的物质即可采用制备型HPLC色谱法，在黄酮类物质的分离过程中经常出现这一方法。制备型HPLC色谱法的优点是分离效果好，速度快，但缺点是价格昂贵，这大大限制了它的应用[9-11]。粱晓芳等采用制备型HPLC色谱法分离了6种大豆异黄酮，分别为大豆苷、黄豆苷、染料木苷、大豆素和染料木素，并且分离的单体黄酮的纯度都高达90%[12]。