1.4 黄酮类物质的活性研究方法

1.4.1 抗氧化活性的研究方法

黄酮类物质抗氧化活性的测定方法包括抗氧化剂还原铁能力（FRAP），二苯代苦肼基自由基（DPPH）法、总氧自由基清除法（TOAC）、总抗氧化能力法（ABTS 法）、羟基自由基清除法（OH）、化学发光（PCL）法等。

DPPH是一种以氮原子为中心的稳定的自由基，氮原子周边有三个苯环，而由于中心氮原子上带有不成对的电子因而能捕获其他的自由基。根据在517nm下DPPH自由基的紫外吸收非常强烈，因此用无水乙醇配制的DPPH溶液呈紫色，当与待测样品反应后颜色会减弱慢慢变成无色或黄色，在517nm下测定反应后样液的紫外吸收值从而计算出样品的抗氧化能力的大小，DPPH方法已经被广泛应用于测定天然活性物质与食品等的抗氧化能力的大小。

ORAC氧化自由基吸收法（Oxygen Radical Absorbance Capacity），即用来测定氧自由基清除能力大小的一种方法。ORAC方法的原理是检测荧光强度的变化来确定样品的抗氧化能力的大小，因为氧自由基可以破坏荧光探针，使荧光发生改变，以Trolox为定量标准物(类似维生素E的一种水溶性物质)，通过荧光微孔板分析仪分析荧光值的变化，当待测物中有抗氧化剂存在时，可以清除原先氧自由基所产生的荧光抑制。待测物的抗氧化能力越强，清除的自由基越多，荧光强度越强，荧光值的变化与抗氧化能力成正比。ORAC方法操作简单、实验重现性好、灵敏度很高、准确度也很好[13]。所以ORAC法在科学研究中被大量使用。

1.5 课题研究的目的和意义

1.5.1 课题背景与研究意义

    黄酮类化合物是植物经光合作用产生的一大类化合物。它的存在形式有两种：游离的苷元以及糖等结合的苷。黄酮类化合物在植物界分布很广泛，如银杏叶、山楂、枸杞、茶叶、降压草等。到目前为止，已发现有5000多种植物中有黄酮类和异黄酮类物质[14]。它们包括双黄酮、黄烷酮、异黄烷酮、双氢黄酮、花色素、色原酮等[15]。黄酮作为一种功能成分，其主要作用有：抗肿瘤，延缓衰老，争强心血功能，治疗慢性前列腺炎，增强免疫力，调节能分泌系统，护肝，抗炎、抗过敏，抑菌、抗病毒等[16]。目前国际上对黄酮类化合物的研究开发十分活跃，其产品的种类很多，在国际上的销售额已达到亿美元。因而开发黄酮新资源及从天然植物中高效的提取与纯化黄酮类化合物有重要的意义。

1.5.2 主要研究内容

(1)以降压草为原料，采用超声波辅助提取法提取总黄酮并用正交实验进行条件优化得出最佳提取条件。

(2)通过静态吸附实验筛选出最佳纯化树脂及最佳纯化条件。

(3)利用筛选出的最佳树脂对提取的黄酮进行分离纯化。

(4)对过柱分离纯化后的黄酮进行抗氧化活性的研究。