随着食品工业的发展，对抗氧化剂的各种要求也越来越高，比如说安全性、稳定性等，目前各种广泛使用的合成抗氧化剂由于其潜在的毒性与致病性，对人体健康均有不利影响。在部分国家和地区已经被明文禁止在食物中的添加[8]。因此，从天然植物香辛料、中草药以及茶多酚中获取安全性高、抗氧化能力强、无副作用的天然抗氧化剂成为探索抗氧化剂发展的必然趋势。

本实验主要通过测定葡萄籽提取物的体外抗氧化水平，如测定总酚含量、ABTS法、FRAP法测定抗氧化活性、DPPH法测定自由基，以及构建模拟体系，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE电泳），western blotting法测定体系内葡萄籽提取物对抑制蛋白质被修饰的作用，旨在验证葡萄籽提取物的真正价值，为将来开发出相对应的抗氧化剂或在食品中应用提供前期的数据支持。

2材料与仪器

2。1  实验材料与试剂

材料：马鲛鱼购于麦德龙超市

试剂：吐温-20，水溶性维生素E(Trolox)，吐温-80，牛血清白蛋白(BSA)，七水硫酸亚铁（FeSO4·7H2O），考马斯亮蓝R250，福林酚试剂，无水乙醇，链霉素，过硫酸钾溶液，5%碳酸钠溶液，三氯化铁（FeCl3），过氧化氢（H2O2），Tris-HCl， TEMED等。

2。2  实验仪器与设备

型号及仪器名称 设备厂商论文网

AR124CN型电子天平 奥豪斯仪器（常州）有限公司

KQ-500型超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司

UV-2802S型紫外分光光度计 UNICO尤尼柯公司

离心机 生工生物工程（上海）股份有限公司

WH-866型旋涡混合器 大仓市华利达实验设备有限公司

TS-100B型恒温摇床 上海天呈实验仪器制造有限公司

PHS-3C型pH计 上海精密科学仪器有限公司

DK-S26型电热恒温水浴锅 上海精宏实验设备有限公司

PowerPac Basic电泳仪 美国伯乐

Trans-Blot SD Cell转膜机 美国伯乐

XHF-D型高速分散器 宁波新芝生物科技股份有限公司

TU-10型恒温金属浴 上海一恒科技有限公司

循环水真空泵 上海聚昆仪器设备有限公司

3  实验方法

3。1葡萄籽提取物的体外抗氧化水平检测

3。1。1 总酚含量测定

参考Chunko 等[9]的方法并根据本实验的情况作适当改动。

（1） 用蒸馏水将0。2ml 80%甲醇溶液稀释至10ml，加Folin-酚试剂1ml，混匀；

（2） 接着加5%碳酸钠溶液5ml，再混合均匀，于室温放置反应60min；

（3） 加蒸馏水补充至25ml，在760nm下测吸光度；

（4） 以没食子酸作为标样，画标准曲线；

（5） 总酚含量以没食子酸当量GAE表示，即没食子酸的总酚含量的mg数等同于1 g葡萄籽提取物的总酚含量。

3。1。2 ABTS法测定抗氧化活性

参考Rer 等[10]的方法并作适当改动。

（1）取88μl过硫酸钾溶液(140mmol/L)与5ml ABTS溶液 (7mmol/L)混合均匀，避光反应12～16h；