UV-B作为植物生长的共同环境胁迫因子对植物次生代谢具有普遍影响。较多的研究表明UV-B辐射增强会对植物的生长造成影响[5],由于植物生长普遍需要光照,因此几乎所有自然生长的植物都会或多或少的受到UV-B胁迫。

面对逆境胁迫,植物并不会“坐以待毙”,而是通过主动防御来消减UV-B辐射带来的不利影响,比如通过改变形态适应、形成屏障保护或诱导修复来防止UV-B损伤[6]。通过合成对UV-B具有吸收阻挡作用的次生代谢产物来减轻UV-B的伤害作用是植物应对UV-B胁迫的一种重要的自我防御策略[7],当然植物对UV-B胁迫的应答是在一定的UV-B剂量范围内的,UV-B过强会使应答机制减弱甚至丧失[8]。因此,在不影响植物生长发育的情况下,利用温和的逆境因子处理是提高果蔬植物体内抗氧化活性物质含量的有效途径之一。通过大量实验摸索得出最适的UV-B照射强度和照射时间,测定UV-B处理对蚕白黄酮等抗氧化活性物质含量的影响,利用定量PCR技术分析UV-B处理对蚕白黄酮生物合成途径关键酶基因表达水平的影响,初步掌握了一些影响果蔬抗氧化物质积累的规律对农业生产具有重要的指导作用[9-12]。

2材料与方法

2。1材料与试剂

实验材料:蚕白种子、石碳土、珍珠岩、蛭石、UV-B灯管、种植盆、所有实验材料均从市场购入。

主要试剂:DPPH乙醇溶液、FeCl3、K3Fe(CN)6 、H3PO4缓冲液、FeCl2、H2O2、水杨酸、C2HCl3O2溶液、乙醇、没食子酸粉末、福林酚试剂、Na2CO3、芦丁标准品、亚硝酸钠、硝酸铝、NaOH。

2。2蚕白的种植

将石碳土、珍珠岩、蛭石按照3:1:1的比例混合均匀,再加入一定量的水混合后装入种植盆中,按4*6的排列打孔,孔深大约2cm,将蚕白种子(购买于浙江省农业科学院)播于孔中,每孔2颗,再用土掩埋,置于培养室中生长。在此期间,植株只接受培养灯管(购买于杭州昊锐生物科技有限公司)的照射。培养条件为:早上8:00至晚上20:00,光周期12 h,光照密度为100 µmol·m-2·s-1(波长为400-700nm),温度26℃,湿度70%。待培养一周后,每周用营养液施肥两次,每次100 mL,待植株长至25天即可UV-B处理。

2。3蚕白样品的处理

2。3。1 UV-B照射条件论文网

将生长25天蚕白进行预设环境处理,设置单变量因素,对照组仍放置于培养室中培养,将实验组放置于强度为2 µmol·m-2·s-1 的UV-B下分别照射2h、4h、8h、24h后与其相应的对照组分别取样。将实验组放置于强度为4 µmol·m-2·s-1 的UV-B下分别照射2h、4h、8h、24h后与其相应的对照组分别取样。

2。3。2 提取液的制备

(1)将新鲜叶片经105℃杀青15min,65℃烘干至恒重后研磨成粉状过100目筛,装袋备用。

(2)精密称量0。2g干粉,用20ml的70%乙醇溶液水浴70℃提取60min,定容至25ml。3次平行。

(3)7000r/min离心15min,取上清液测定。

2。4蚕白抗氧化活性的测定 

2。4。1 DPPH自由基清除率的测定

实验前配制样品提取液,同时用无水乙醇配制 0。2mmol/L 的DPPH溶液。移取提取液1mL置于试管中,同时加入 4mL 刚配制好的0。2mmol/L的DPPH乙醇溶液充分混合均匀,置于暗处,进行反应,时间为30min。最后在517nm波长处测定反应后的吸光度。测定 DPPH自由基清除率的计算公式如下式所示,

                      K(%)=[1-(A1-A2)/A0]*100                 

其中A1为样品溶液的吸光度,A2为未添加DPPH的吸光度,A0为未添加样品溶液的吸光度。

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