血管紧张素转化酶2在不同日龄猪肠道中的表达差异(2)
2002年，Michael等[7]研究发现，ACE2是文持心脏正常功能的重要调节因子。同年，Kenneth[8]揭示了ACE2和ACE之间的拮抗关系，并具体阐述了ACE2在心血管系统中的作用。2003年，Moore等[9]证实ACE2是传染性非典型肺炎（严重急性呼吸道综合征，sever acute respiratory syndrome, SARS）冠状病毒受体；2009年，Camargo等[10]提出，肠黏膜中性氨基酸转运载体B0AT1的活性的增高与ACE2高表达有关，ACE2起到增加中性氨基酸转运的作用。2012年，Hashimoto[11]研究提出，ACE2引起的氨基酸转运机制的失衡与肠道内容物中微生物所处环境和肠炎易感性的发生密切相关。同年，Thatcher S E等[12]发现小鼠的葡萄糖不耐受与骨髓衍生细胞ACE2的缺失有关。众所周知，胰岛素是常用的降糖药物，主要通过加速葡萄糖的分解和利用并抑制糖原的分解和糖异生降低血糖浓度。2014年，Cao X等[13]发现〔ACE2-Ang（1-7）-Mas〕轴的激活可以改善机体对葡萄糖的过度摄取，并减少肝脏糖原的合成，进而改善了肝脏的胰岛素水平。该研究也为2型糖尿病的诊疗提供了新的思路。2015年，Bernardi S等[14]通过饲喂C57b16J小鼠和ACE2基因敲除小鼠高脂饲料和标准饲料以及随后相关指标的检测，来探讨ACE2对心肌和骨骼肌内葡萄糖水平的影响。研究结果显示，ACE2基因敲除小鼠存在明显的胰岛B细胞缺陷，并且胰岛素浓度显著降低。而在骨骼肌中可以发现葡萄糖转运蛋白表达升高，ACE2缺失小鼠机体内葡萄糖的利用率正不断增高。近十多年来，诸如此类的研究成果使得人们愈发重视ACE2在机体疾病发生发展过程中的重要作用，并进一步地理解这一分子机制。
目前关于ACE2的研究主要集中在人类和啮齿类动物。通过近些年来的研究发现，ACE2 的表达存在明显的物种差异。有关畜禽动物方面的研究相对较少，不少领域尚且处于空白阶段，尤其关于猪肠道组织中ACE2的分布、表达、调控以及相关功能的数据非常有限。随着猪病防控在生猪养殖中的意义不断增大，系统而全面地对猪肠道组织内ACE2的分布、表达、调控以及在物质转运等方面的研究具有重要的理论和应用价值。这不仅能有效的揭示ACE2在生理学和病理学上的分子机制，还能为某些畜禽疾病（尤其是心血管和消化系统疾病）的诊断和治疗提供科学依据，从而更好的成为畜牧产业发展的坚实“后盾”。
随着改革开放以来人民生活水平的日益提高，老百姓对于畜产品的需求越来越大，带动了畜牧业和其他产业的蓬勃发展。实现畜牧业的健康发展也国家实现现代化具有长足的意义和深远的影响。现如今的畜牧业已经实现了“从无到有”的阶段，正在稳步迈进“从有到优”的新阶段。但随着畜牧业集约化和规模化水平的不断提高，做好畜禽疾病的防范工作已经成为关乎动物福利和畜牧产业经济价值的重要因素。除了做好传染病的防制，搞好动物营养与健康工作具有更是具有重要的现实意义。例如，在生产实践过程中，倘若不做好相关仔猪的保育等相关工作，可能会导致其死亡率迅速增高，给农户带来严重的经济损失。为此，针对于猪胃肠道等疾病的研究就凸显的至关重要，亟需在分子水平阐释其致病机制。因此，本研究选取了不同日龄猪为研究对象，从分子生物学的角度出发，探讨ACE2在不同日龄猪肠道内的分布情况，并在基因水平上进行相对定量的检测，从而为提高仔猪胃肠道局部RASS的功能开发、靶组织ACE2的作用等方面提供新的思路。
1 材料与方法
1．1 试剂和仪器
Trizol试剂盒（日本TaKaRa Bio株式会社宝生物工程（大连）有限公司）；M-MLV反转录酶、RNA抑制剂（美国普洛麦格（Promega）公司）；AceQTMqPCR SYBR Green Master Mix（Vazyme Biotech Co.Ltd）；RT-PCR试剂盒、随机引物、dNTP、5×RT buffer（南京生兴生物技术有限公司）等。