微生物复合菌肥对温室黄瓜生长的影响(4)
1.5.2.2 操作步骤
(1)α-萘胺标准曲线的绘制：用40ug/mLα-萘胺溶液配制成0、5、10、20、30、40ug/mL，配制方法和数据如表1所示
表1 各浓度α-萘胺的配制：用40ug/mL溶液配制
浓度 5ug/mL 10ug/mL 20ug/mL 30ug/mL 40ug/mL
40ug/mLα-萘胺(mL) 5 10 20 30 40
蒸馏水 35 30 20 10 0
表2 α-萘胺标准曲线的绘制
试管号 1（对照） 2 3 4 5 6
α-萘胺(mL) 1(水) 1 1 1 1 1
磷酸缓冲液（mL） 1 1 1 1 1 1
蒸馏水（mL） 15 15 15 15 15 15
对氨基苯磺酸（mL） 1 1 1 1 1 1
100ppm亚硝酸钠（mL） 1 1 1 1 1 1
取优尔只试管，按表2加入各溶液并混匀，置室温(20-25度)下5分钟使之显色，最后加入蒸馏水，使整个容积为25mL,摇匀，在20~60分钟内用510nm波长进行比色，以对照光密度为0，读取光密度，以α-萘胺含量作横坐标，光密度作纵坐标绘制标准曲线。
(2)将待测根系吸净吸干附着水称取1g放入100mL三角瓶中，加40ug/mL的α-萘胺溶液和磷酸缓冲液各25mL，混匀。
(3)静置5~10分钟后（根吸附以完毕），从瓶中取2mL溶液放入25mL容量瓶。将其余的溶液塞好瓶塞后，放在震荡器上，在25℃下震荡3~6小时（如无震荡器时要在反应期间，定时的摇动），反应时间完毕后，再取2mL溶液放入另一刻度试管，因为α-萘胺溶液会自动氧化，所以要同时做无根的同样操作的空白试验（根样最好用整根：用切碎的根，α-萘胺溶液的氧化量会意外增加）。
(4)在上述两次及空白试验所吸取的2mL测定液中，各加入10mL蒸馏水，混匀后再加入1%对氨基苯磺酸1mL和100ug/mL的亚硝酸钠溶液1mL，混匀，置于室温下5分钟使之显色，然后加入蒸馏水，使整个容积为25mL，在20~60分钟内用510nm波长进行比色，读取光密度，由标准曲线查出α-萘胺含量。
1.5.2.3 结果计算
根系对α-萘胺的生物氧化量Y（ug•g-1•h-1）按下式进行计算
Y=[（A-B）-（C-D）]*E/（t*W）
式中：A-第一次取液测定值（ug•mL-1），作为开始值，这是根表面氧化物质的氧化作用而不是根的酶促反应；B-第二次取液测定值，是根的酶促反应后（如3小时）剩余的α-萘胺浓度（ug•mL-1）。A-B即α-萘胺氧化总量；C-第一次空白测定值（ug•mL-1）；D-第二次空白测定值；C-D即α-萘胺自发氧化量；E-稀释倍数24（48/2）（因从48mL中又取2mL）；t-3小时；W-样品鲜重（也可以用干重计算）。
1.5.3 黄瓜幼苗SOD活性的测定[9-11]
1.5.3.1 试剂
(1)0.05mol/L pH7.8磷酸缓冲液：32.6g Na2HPO4•2H2O和2.65g NaH2PO4•2H2O用蒸馏水定容到1000mL容量瓶中。
(2)0.26mol/L甲硫氨酸溶液：称取1.9399g Met用磷酸缓冲液定容至100mL，低温避光保存，可使用1~2d。