耐有机相氧化亚铁硫杆菌的驯化及培养特性研究(2)
但是，目前我国对于氧化亚铁硫杆菌的应用研究[18]，大部分处于实验室和半工业试验水平，未能实现规模化应用，其中很重要的原因是原始驯化菌嗜酸，易对钢铁和混凝管道造成腐蚀；属嗜中温菌，超过45℃就不能生长；且生长周期长，这都大大限制了它在工业和环保领域的应用。因此，必须在不同的应用领域培养驯化适应不同环境的特效菌种，并采用快速、高效、新的育种方法对现有菌株进行改良，以期获得多株具有繁殖速率快，氧化能力强，适应性强，特别是对多种重金属离子、表面活性剂、氯离子的耐受性强的优良工业用菌。国内对于耐有机相氧化亚铁硫杆菌还没有专有的研究，而对于菌种多种环境中的综合应用的目的，必须在不同的应用领域培养驯化适应不同环境的特效菌种。通过驯化，氧化亚铁硫杆菌对有机相均具有良好的抗性作用，在一定的浓度范围内，可通过逐步增加有机相的浓度诱导细菌产生有机相抗性，从而增强氧化亚铁硫杆菌在有机相中保持的较高的生物活性。这样可以让T.F菌在实际工业生产中起到更好的作用，所以此时对耐有机相氧化亚铁硫杆菌的驯化及培养特性的研究是有必要的。
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验试剂
表2-1 9K培养基材料
名称 纯度等级 生产厂家
(NH4)2SO4 分析纯 广东光华化学厂有限公司
K2HPO4 分析纯 南京化学试剂厂
KCL
MgSO4•7H2O 分析纯
分析纯 南京化学试剂厂
上海通亚精细化工厂
Ca(NO3)2 分析纯 温州市化学用料厂
FeSO4•7H2O 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
表2-2 重铬酸钾法实验试剂
名称 纯度等级 生产厂家
重铬酸钾溶液 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
二苯磺酸钠溶液 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
硫酸溶液（18moL/L） 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
磷酸溶液 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
其中将硫酸溶液和磷酸溶液混合成硫磷混酸，方法为边搅拌边将200mL磷酸注入约500mL水中，再加入300mL酸（9mol/L），混匀，冷水冷却。另外还有一个很重要的实验试剂就是有机相（煤油+Lix84n），有1.5%和5%规格的，一下简称有机相。
2．1.2 实验器材
表2-3 实验器材
名称 型号 生产厂家
全温摇瓶柜 HYG-A 培英
不锈钢手提灭菌器 DSX-280B型 上海申安医疗仪器厂
血球计数板
显微镜 XB-K-25
XSP-BM-2CA 上海求精生化仪器有限公司
BM上光
2.2 分析方法
2.2.1 重铬酸钾滴定法
实验过程中对于亚铁氧化率的测定是通过重铬酸钾滴定法测定亚铁含量来换算的。重铬酸钾滴定法如下：
本法所使用到的主要试剂，其配置方法如下所列：
1）9mol/L硫酸溶液；500mL硫酸稀释至1000mL。
4）15:85的磷酸溶液：150mL磷酸溶解于850mL水中。
5）5g/L二苯胺磺酸钠：称取0.5二苯胺磺酸指示剂，溶解于100mL水中，加入1到2滴硫酸，摇匀，贮于棕色试剂瓶中。
6）0.01667mol/L重铬酸钾溶液：称取4.9g预先在140℃～150℃干燥2h，在干燥器中冷却至室温的重铬酸钾（基准）溶于水中，冷却至20℃后移至1000mL的容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。
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