复合菌肥在黄瓜上施肥方法研究(3)
1.4.2 黄瓜幼苗生理生化指标的测定
1.4.2.1 叶绿素含量的测定
1.4.2.1.1 试剂
（1）80%丙酮 （2）石英砂
（3）碳酸钙粉
1.4.2.1.2 操作步骤
称取洁净的植物叶片0.1g，剪碎后装入于盛有15mL丙酮＋无水乙醇混合提取液(丙酮与无水乙醇的体积比为1：1)的小刻度试管中，塞上橡皮塞，置于38~40℃的恒温箱中浸提约3h到剪碎的叶片呈白色而溶液呈绿色为止，冷却到室温后用提取液再定容到15mL刻度处，摇匀后用分光光度计分别在波长470nm、645nm和663nm处测定并记录光密度值，通过OD值计算叶绿素含量。
1.4.2.1.3 结果计算
叶绿素a含量Ca(mg/L)=12.21A663 - 2.81 A645
叶绿素b含量Cb(mg/L)=20.13 A645 – 5.03A663
类胡萝卜素含量Cx . c(mg/L)=(1000A470 – 3.27Ca-104 Cb)/229
叶绿体色素的含量=(色素的浓度×提取液总体积×稀释倍数)/样品鲜重
1.4.2.2 根系活力的测定
1.4.2.2.1 试剂
（1）乙酸乙酯（分析纯） （2）次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。
（3）1％TTC溶液 （4）1/15 mol/L，pH7.0磷酸缓冲液。
（5）1 mol/L硫酸
1.4.2.2.2 操作步骤
（1）绘制TTC的标准曲线 取0.2mL大试管放入0.4％TTC溶液，加乙酸乙酯9.8mL，再加少量固体Na2S2O4粉末摇匀，即产生红色而不溶于水的TTF(三苯基甲腙）。此溶液浓度为TTF 80µg/mL。分别取5个10mL刻度试管，取此溶液0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL分别放入，再用乙酸乙酯定容，即得到系列标准溶液，分别含TTF20µg、40µg、80µg、120µg、160µg，在485nm波长下测定吸光度，以乙酸乙酯作参比，完成标准曲线的绘制。
（2）称取0.02g根尖样品，分别放在标号的小烧杯中，加入0.4％TTC溶液5mL、磷酸缓冲液（pH7.0）5mL，让根在溶液中充分浸没，在37℃黑暗条件下保温1～2h，此后立即取1mol/L硫酸2mL加入，以停止反应。同时再做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其溶液浓度、操作步骤同上，37℃黑暗条件下保温后不加硫酸。
（3）把根从溶液中取出，吸干表面的液体，置于研钵中，加3～4mL乙酸乙酯，充分研磨，以提出TTF。然后取刻度试管将红色提取液移入，再用少许乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次，转移到刻度试管，再补加乙酸乙酯至总量为10mL，以空白试验作参比测出吸光度，在波长485nm下比色，根据标准曲线，得到TTC还原量。
1.4.2.2.3 结果计算
根系活力=C/(1000*W*h) [mg TTF/（g•h)]
式中：C—四氮唑还原量，μg；W—根重，g；h—时间，h；
1.4.2.3 超氧化物歧化酶（SOD）活性的测定
1.4.2.3.1 试剂
（1）A：Tris 0.2mol/L （2）B：HCl 12mol/L
（3）250mLA+200mLB定溶至1000mL pH=8.3
1.4.2.3.2 步骤
表1 SOD活力测定加样表
试剂 对照管 样品管
Tris-HCl缓冲(pH=8.3) 8mL 8mL
粗酶液 － 15μL
连苯三酚溶液 － 10μL
HCl 10μL －
总量 8mL 8mL
（1）称取植物材料0.1g，分三次加pH=8.3，50mmol•L-1的Tris-HCl缓冲液共1mL。
（2）每个样品设三个重复，于2~4℃下研磨，12000r/m离心15min，制粗酶液。
（3）将8mL50mmol/L(PH=8.3)Tris-HCl缓冲液在25℃保温20min，再加入10µL 50mmol/L的连苯三酚（已在25℃下预热），对照管用10mmol/Lde HCl代替，先加酶液再加连苯三酚。
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