黑豆豆芽异黄酮微波提取工艺研究(2)
本实验的意义在于至今人们大都在大豆中提取异黄酮[4]，但是黑豆比大豆有更高的营养和医药价值，利用微波辐射技术从黑豆豆芽中提取异黄酮，并系统地研究了该工艺的影响因素，以期为黑豆的综合开发提供依据。
1 实验部分
1.1 实验所用材料、试剂及仪器
材料：黑豆。
试剂：染料木素（上海金穗生物科技有限公司，HPLC≥98%）、蒸馏水、无水乙醇、正己烷、次氯酸钠。
仪器：722型紫外线分光光度计（上海元析仪器有限公司）；微波炉（顺德市格兰仕微波炉电器有限公司）；AL204电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司；恒温干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司。
1.2 原料的处理[5]
黑豆豆芽的制备流程：黑豆——筛选——消毒——清洗——浸泡——发芽——清洗——低温干燥。
挑选成熟饱满未有破损的种子，10%次氯酸钠消毒处理2 min，自来水冲洗，然后用蒸馏水清洗4次，置于烧杯加入适量的蒸馏水，置于恒温箱中30℃浸泡15 h，然后从烧杯中取出沥干，转移到培养皿中，在25℃的恒定培养箱中进行培养发芽102 h。发芽结束后，清洗，在干燥箱中低温烘干。
1.3 黑豆豆芽异黄酮的提取及含量测定
1.3.1 异黄酮提取工艺流程
干燥的黑豆豆芽——粉碎——正己烷脱脂（料液比1:3）2次——低温干燥——粉碎——称重——醇提，微波处理2次——抽滤——合并提取液——定容至一定体积——测吸光度。
1.3.2 染料木素标准溶液的配制
准确称取10 mg，用70%溶解并定容至250 mL，摇匀，配制成40 mg/L的标准溶液。
1.3.3 异黄酮标准曲线的绘制[6]
分别移取0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90 mL的染料木素标准溶液，置于各个试管中，用70%乙醇定容至10 mL，摇匀，以70%乙醇调零，在260 nm处测定吸光度。以待测试管中染料木素的浓度(μg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，如图1，并作回归处理得回归方程y=0.1166x-0.0015，R2=0.9988。
图1 异黄酮标准曲线
1.3.4 黑豆豆芽提取液中异黄酮提取率的测定[7]
准确量取1 mL稀释样品液置于试管中，加入70%乙醇至10 mL，摇匀，并以70%乙醇调零，260 nm处测定吸光度。根据回归方程算出样品液中异黄酮的浓度，按照以下公式计算黑豆豆芽提取物异黄酮的提取率（mg/g）。
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