玉竹提取物在美白产品中的应用研究(6)
2.2.4 竹菊提取液O/W型乳化体系的性能测试
（一）测试标准及项目
（1） 乳化体的外观测试。采用目测法，主要观察样品的洁白度，光泽度，稠度，分散均匀度等外观性质。
（2） 乳化体稳定性测试。采用快速稳定性测试法，主要测试样品的pH值，黏度值。
（二）稳定性测试的方法
（1）首先进行离心测试：称取试样10g，装入带有刻度的离心管中，以3000r/min离心30min，观察有无分层现象。
（2）耐寒测试：取25g左右的样品与干燥的小号干观察品中，盖紧盖子，放置温度-18℃的冰箱中恒温一周后，将样品取出，自然升温到室温，并测定其pH值，观察有无分层现象，共测时4周。
（3）耐热测试：取25g左右的样品与干燥的小号干观察品中，盖紧盖子，放置温度48℃的冰箱中恒温一周后，将样品取出，自然降温到室温，观察有无分层现象，并测定其pH值，共测时4周。
（4）常温测试：取25g左右的样品与干燥的小号干观察品中，盖紧盖子，常温放置一周后，将样品取出，观察有无分层现象，并测定其pH值，共测时4周。
（5）光照测试，取25g左右的样品与干燥的小号干观察品中，盖紧盖子，放置阳光充足的室内一周后，将样品取出，自然降温到室温，观察有无分层现象，并测定其pH值，共测时4周。
2.2.5 玉竹提取液和竹菊提取液美白功效测试
（一）细胞培养
使用B-16 黑素瘤细胞株[8]。待细胞生长至近融合状态，经0.25%胰蛋白酶消化，用含10 %小牛血清的 RPMI1640培养液传代，置于CO 2培养箱37℃，5 %CO2饱和湿度环境中进行培养。每一次实验取自同一传代细胞，初始接种细胞浓度为5000 个/ cm左右。细胞接种24h后,用添加受试美白剂的新鲜培养基换液1次(各设4个剂量组:玉竹提取液的实验终浓度分别为5 、10 、20 、40mg/ ml;熊果苷终浓度为 5 、10 、20 、40mg/ ml；竹菊美白方终浓度为5 、10 、20 、40 mg/ ml)。继续孵育72h后收获细胞,用台盼蓝排斥法[17]计数活细胞数后进行酪氨酸酶活性测定。
（二）酪氨酸酶活性的测定方法[16]
将培养到期的各组细胞经0.25 %胰蛋白酶消化离心后,用PBS缓冲液清洗两次，再用PBS 缓冲液将沉淀细胞吹打成悬液记数后备用。酪氨酸酶活性是根据将多巴氧化为多巴醌的速度来确定的。参照Hideya Ando等报道的方法[16],进行酪氨酸酶活性的测定。取备用细胞悬液加 PBS 缓冲液,调节细胞密度至105mg/ ml 左右,各吸取1mL 细胞悬液分别置于3个平行管中,离心后弃去上清液,加入1mL 0.5 %脱氧胆酸钠溶液,并充分振摇使细胞溶解,制备含有活性酪氨酸酶的细胞裂解物。将试管置于 0 ℃15min ,再置于37℃10min ,即刻加入0.1% L-DOPA溶液 ,振摇后在分光光度计475nm波长,分别于0min 和10min 时读取吸光度值,计算两个时段吸光度值的差值，并除以细胞数。酪氨酸酶活性用处理组A475值占空白对照组A475值的百分率来表示。
（三）实验原理
美白机理：要使皮肤美白和祛除色斑，其目的和方法就是要减少体内黑色素的生成。在黑色素的形成过程中，体外是紫外线照射的诱导，体内是需要有酪氨酸、酪氨酸酶(活性)及黑色素体。[11]
故美白的主要途径
1避免紫外线的强烈照射：即皮肤一定要注意防晒。
2抑制酪氨酸酶的活性：在黑色素生成的过程中，抑制各反应进程，限制酪氨酸向黑色素转化，避免酪氨酸转化产生过多的黑色素。
3抑制氧化反应，清除活性氧。
4减少形成黑色素：可采用黑色素还原方法和加速表层黑色素细胞的脱落。
5抑制黑色素细胞的活性，如使黑色素细胞特异性中毒等。[19]